蛋白表達(dá)后如何提升蛋白的表達(dá)量和可溶性比例

　　無論采用哪種表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)蛋白時，都會遇到一些問題，比如蛋白析出、蛋白表達(dá)量不高、表達(dá)條件不是最佳等等，使得所得蛋白沒有達(dá)到預(yù)期。其實，這個問題除了我們在表達(dá)步驟設(shè)計上的問題外，還有就是在一些操作細(xì)節(jié)上不太規(guī)范。那么，有沒有什么辦法來提升蛋白表達(dá)及其可溶比例呢?今天，普健生物就和大家具體聊聊。

　　1、優(yōu)化密碼子。根據(jù)表達(dá)系統(tǒng)對密碼子的偏好性進(jìn)行優(yōu)化篩選，提升表達(dá)效率。一般來說，我們優(yōu)先選擇那些使用頻率大于20%的密碼子，避免因為不充足的tRNA庫，導(dǎo)致翻譯的延遲或錯配;

　　2、降低表達(dá)速率?？梢酝ㄟ^降低IPTG的誘導(dǎo)濃度來降低蛋白的表達(dá)速率，通過速度的降低，使得其折疊率得到更好的平衡，最終提升蛋白的可溶性;

　　3、控制好溫度。當(dāng)溫度保持在37度時，蛋白就容易形成一些包涵體，而30度的表達(dá)條件則更容易產(chǎn)生可溶、有活性的蛋白。所以，我們在表達(dá)蛋白的是，盡量控制溫度保持在16、18或21度(當(dāng)然了，在表達(dá)過程中會產(chǎn)生一定的熱量，我們需要做好溫度監(jiān)控，及時予以調(diào)節(jié));

　　4、改善細(xì)胞周質(zhì)載體。細(xì)胞周質(zhì)環(huán)境在一定長度上制約著蛋白的形成，優(yōu)勢的話更加有利于蛋白的折疊及二硫鍵形成;

　　當(dāng)然了，還有很多其他方面的原因會制約到蛋白的表達(dá)和可溶性，我們在文章：蛋白表達(dá)-哪些因素會影響到蛋白表達(dá)?中和大家具體聊過，大家有興趣的話可以具體點擊閱讀一下。

　　其實在蛋白表達(dá)的過程中，因為選擇表達(dá)系統(tǒng)的不同、操作步驟不同、技術(shù)細(xì)節(jié)調(diào)整等一系列的差異下，都會造成所表達(dá)的蛋白和預(yù)期有著一定的偏差，其實這是正常的。畢竟，制約著表達(dá)成功與否的關(guān)鍵因素實在是太多了，只有將每個細(xì)節(jié)做到完善，才能表達(dá)出我們所需的蛋白。普健生物作為一家擁有15年蛋白表達(dá)經(jīng)驗的公司，專業(yè)為廣大用戶提供蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。

本文網(wǎng)址：http://evonsdesigns.com/archive/624.html，轉(zhuǎn)載請標(biāo)明出處，謝謝