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桿狀病毒昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)重組蛋白的優(yōu)劣勢(shì)

發(fā)表時(shí)間:2024-06-03 訪問(wèn)次數(shù):1141

  桿狀病毒昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)(Baculovirus Expression Vector System, BEVS)是一種以昆蟲(chóng)細(xì)胞為宿主細(xì)胞,依托桿狀病毒為外源基因載體,從而實(shí)現(xiàn)外源基因表達(dá)的表達(dá)系統(tǒng)。在生物制備領(lǐng)域中,昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是一種強(qiáng)大的工具。

桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)

  桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的制備流程:

  1、質(zhì)粒構(gòu)建。將提取出的目的基因插入到桿狀病毒基因中(主要是線性或環(huán)狀的DNA質(zhì)粒);

  2、細(xì)胞轉(zhuǎn)染。將構(gòu)建的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到選定昆蟲(chóng)細(xì)胞中,使得目標(biāo)基因得以表達(dá);

  3、蛋白表達(dá)。對(duì)所得細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),使得目標(biāo)基因得以轉(zhuǎn)錄和翻譯,從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的表達(dá);

  4、蛋白包裝。將病毒顆粒釋放到培養(yǎng)基中,從而獲得以及純化所需目的蛋白;

  桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的常用方法:

  1、轉(zhuǎn)染方法。轉(zhuǎn)染的方法很多,比如鈣磷沉淀法、電穿孔法等;

  2、標(biāo)記方法。利用對(duì)表達(dá)載體進(jìn)行標(biāo)記,從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的篩選;

  桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì):

  1、安全性高。因?yàn)橹苽溥^(guò)程中僅采用桿狀病毒來(lái)轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞,不會(huì)感染到其他細(xì)胞,所以不會(huì)對(duì)人體造成影響;

  2、表達(dá)高效。通過(guò)各種酶的使用,使得蛋白得以正確折疊以及翻譯后修飾,從而實(shí)現(xiàn)復(fù)雜蛋白的表達(dá);

  3、適合大規(guī)模生產(chǎn)。昆蟲(chóng)細(xì)胞可以在無(wú)血清的培養(yǎng)基中生長(zhǎng),從而實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn);

  4、應(yīng)用廣泛。在蛋白功能研究、藥物發(fā)現(xiàn)研究等方面有著廣泛的使用;

  桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的局限性:

  1、表達(dá)不穩(wěn)定。因?yàn)椴《敬嬖谝欢ǖ亩拘?,其?huì)造成宿主細(xì)胞的裂解,從而影響蛋白的穩(wěn)定性;

  2、糖基化水平低。當(dāng)我們對(duì)蛋白進(jìn)行糖基化時(shí),可能會(huì)造成單的不穩(wěn)定以及免疫原性;

  3、基因組不穩(wěn)定。桿狀病毒基因組會(huì)存在一定的不穩(wěn)定性,從而影響到蛋白的長(zhǎng)期表達(dá)和穩(wěn)定性;

  桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)的注意事項(xiàng):

  1、需要選擇合適的表達(dá)系統(tǒng)。結(jié)合目的蛋白的性質(zhì)來(lái)選擇合適的表達(dá)載體,從而確保載體與目的基因的相容性;

  2、對(duì)表達(dá)條件進(jìn)行優(yōu)化。對(duì)于不同的昆蟲(chóng)細(xì)胞,需要結(jié)合其感染以及培養(yǎng)條件,選擇最優(yōu)的培養(yǎng)條件;

  3、對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行合理地設(shè)計(jì)。相對(duì)其他表達(dá)系統(tǒng)來(lái)說(shuō),桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)存在一定的復(fù)雜性,需要對(duì)其實(shí)驗(yàn)過(guò)程進(jìn)行合理地設(shè)計(jì);

  桿狀病毒昆蟲(chóng)表達(dá)系統(tǒng)存在著極大的優(yōu)勢(shì),不僅高效,而且在蛋白修飾方面有著極大的優(yōu)勢(shì),為生物學(xué)以及制備領(lǐng)域研究有著極大的優(yōu)勢(shì)。通過(guò)對(duì)其原理以及流程、操作等方面的調(diào)整,能夠更好地實(shí)現(xiàn)蛋白的表達(dá)。當(dāng)然了,這套蛋白表達(dá)系統(tǒng)也存在著一定的不足之處,需要結(jié)合具體的情況來(lái)進(jìn)行選擇。更多蛋白表達(dá)的相關(guān)知識(shí),敬請(qǐng)關(guān)注武漢普健生物。