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盤(pán)點(diǎn)質(zhì)粒提取過(guò)程中的一些常見(jiàn)問(wèn)題

發(fā)表時(shí)間:2023-09-18 訪問(wèn)次數(shù):866

  質(zhì)粒廣泛存在于生物界,是易總存在于染色體意外的DNA分子,具備自主復(fù)制能力。在日常蛋白制備過(guò)程中,我們常常通過(guò)基因技術(shù)對(duì)質(zhì)?;蛐畔⑦M(jìn)行修改,從而制備我們所需的蛋白。但是在制備過(guò)程中,會(huì)遇到很多問(wèn)題,導(dǎo)致蛋白制備失敗。有鑒于此,普健生物和您具體聊聊有關(guān)質(zhì)粒提取過(guò)程中的一些常見(jiàn)問(wèn)題。

  1、時(shí)間控制方面的問(wèn)題

  對(duì)于裂解來(lái)說(shuō),時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),一般來(lái)說(shuō),不要超過(guò)5分鐘。吸附時(shí)間不夠,或者溶解時(shí)間不夠,都會(huì)造成質(zhì)粒DNA提取失敗;

  2、大腸桿菌老化

  大腸桿菌頻繁使用會(huì)導(dǎo)致其老化的現(xiàn)象,所以,在進(jìn)行大腸桿菌培養(yǎng)時(shí),需要重新挑選菌落進(jìn)行培養(yǎng);

  3、質(zhì)粒復(fù)制數(shù)量過(guò)低

  所選質(zhì)粒拷貝數(shù)過(guò)低,會(huì)在很大程度上早場(chǎng)質(zhì)粒DNA提取量低的情況,在實(shí)驗(yàn)時(shí),需要盡可能挑選高拷貝數(shù)的載體;

  4、配置的溶液使用不當(dāng)

  溶液溫度過(guò)低時(shí),可能會(huì)出現(xiàn)渾濁的情況,之后保持在37度的環(huán)境下,才能保證溶液清亮;

  5、吸附柱過(guò)載

  對(duì)于不同的產(chǎn)品來(lái)說(shuō),吸附柱的吸附能力是各不相同的,如果提取的質(zhì)粒數(shù)量較大,需要進(jìn)行多次提取;

  6、質(zhì)粒未能全部溶解

  洗脫質(zhì)粒的時(shí)候,需要適當(dāng)對(duì)其進(jìn)行加溫或延長(zhǎng)溶解時(shí)間;

  7、洗脫液加入的位置不對(duì)

  洗脫液需要在硅膠膜的中間位置加入,這樣才能保證其達(dá)到最大洗脫率;

  8、過(guò)多的乙醇?xì)埩?/p>

  在我們選擇漂洗液進(jìn)行洗滌后,需要盡可能地去除殘留的液體,以避免殘留的乙醇對(duì)后期的實(shí)驗(yàn)造成影響;

  9、洗脫液的體積過(guò)小

  洗脫體積對(duì)回收率會(huì)造成一定的影響,過(guò)高的洗脫體積會(huì)造成產(chǎn)品濃度過(guò)低的情況;

  雖然說(shuō)質(zhì)粒提取能夠在很大程度上降低目的蛋白制備的操作步驟,但是,操作過(guò)程中也有很多需要注意的細(xì)節(jié)問(wèn)題,需要在制備過(guò)程中多注意。當(dāng)然了,對(duì)于大部分的公司來(lái)說(shuō),這個(gè)過(guò)程基本上都不成問(wèn)題。普健生物為您提供專業(yè)的蛋白制備服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢。