重組蛋白表達(dá)是生物領(lǐng)域中一項(xiàng)非常重要的技術(shù)手段,它通過(guò)將外源基因克隆到宿主細(xì)胞內(nèi),然后表達(dá)出目標(biāo)蛋白的過(guò)程。重組蛋白表達(dá)分為很多步驟,需要注意其中所有的操作細(xì)節(jié),只有這樣才能獲得所需目的蛋白。那么,武漢普健生物的重組蛋白制備過(guò)程是怎樣的呢?
1、基因克隆
想要表達(dá)蛋白,首先就是要將目的基因克隆到宿主細(xì)胞中,通常采用的方法如下:
PCR擴(kuò)增:采用PCR技術(shù)將目的基因擴(kuò)增到宿主基因序列中;
酶切和連接:通過(guò)內(nèi)切酶切割DNA,然后將目的基因連接到載體上;
克?。簩?gòu)建好的質(zhì)粒導(dǎo)入宿主細(xì)胞中;
2、表達(dá)優(yōu)化
當(dāng)目的蛋白導(dǎo)入到細(xì)胞中后,其內(nèi)部環(huán)境不一定適合目的蛋白的表達(dá),這個(gè)時(shí)候就需要優(yōu)化細(xì)胞表達(dá)條件了。主要涉及到如下幾個(gè)方面:
啟動(dòng)子優(yōu)化。通過(guò)選擇合適的啟動(dòng)子來(lái)調(diào)控基因的轉(zhuǎn)錄水平;
信號(hào)肽優(yōu)化。通過(guò)適當(dāng)?shù)靥砑有盘?hào)肽來(lái)提升蛋白的分泌;
外部環(huán)境優(yōu)化。通過(guò)調(diào)控溫度、PH值、營(yíng)養(yǎng)成分等環(huán)境來(lái)替僧蛋白表達(dá)效率
3、蛋白表達(dá)
當(dāng)滿足如上的這些條件后,就可以實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的表達(dá)了;
誘導(dǎo)蛋白表達(dá)。通過(guò)適當(dāng)?shù)靥砑诱T導(dǎo)劑來(lái)誘導(dǎo)蛋白的表達(dá);
培養(yǎng)。在保持表達(dá)環(huán)境的情況下,繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞來(lái)表達(dá)蛋白;
4、蛋白純化
通過(guò)各種分離手段(親和層析、離子交換層析、凝膠過(guò)濾等)來(lái)分離出蛋白,實(shí)現(xiàn)蛋白的純化;
5、蛋白驗(yàn)證
對(duì)所得蛋白進(jìn)行相關(guān)驗(yàn)證,以保證其質(zhì)量和功能;
我們知道,重組蛋白表達(dá)是一個(gè)復(fù)雜且精細(xì)的過(guò)程,通過(guò)合理的設(shè)計(jì)和專業(yè)的操作,嚴(yán)謹(jǐn)?shù)貓?zhí)行每一個(gè)操作過(guò)程。武漢普健生物作為一家擁有十多年蛋白抗體制備經(jīng)驗(yàn)的公司,擁有專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),可以根據(jù)用戶的需求進(jìn)行相關(guān)蛋白定制服務(wù)。更多重組蛋白需求,敬請(qǐng)關(guān)注普健生物。