重組蛋白之蛋白純化的原理與步驟

　　在重組蛋白表達(dá)完成之后，最主要的一個(gè)步驟就是蛋白純化，只有通過(guò)純化后的蛋白才能投入下一輪的使用中，否則，很容易對(duì)后期的使用產(chǎn)生影響。蛋白純化需要從復(fù)雜的混合物之中將目的蛋白提取出來(lái)，而且需要保持抗體的結(jié)構(gòu)和功能。因此，了解蛋白純化的原理和過(guò)程就顯得尤為重要了。在本文中，普健生物將和大家詳細(xì)地介紹一下重組蛋白制備時(shí)蛋白純化的具體過(guò)程。

　　蛋白純化的原理：

　　蛋白純化在生物工程中是一項(xiàng)非常常用的技術(shù)，能夠有效提升目的蛋白的純度，對(duì)后期的使用和檢測(cè)都有著非常好的促進(jìn)作用。蛋白純化需要結(jié)合樣本以及雜質(zhì)的特性來(lái)選擇合適的方法，既要保證過(guò)程的簡(jiǎn)單，又要不對(duì)蛋白的特性造成影響。

　　當(dāng)然了，對(duì)于純度要求較高的實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)，需要在常用純化方法中添加一個(gè)例子交換或疏水作用色譜的中間步驟。

　　需要注意的是，在蛋白純化的過(guò)程中，盡量選擇哪些步驟少的純化方式，因?yàn)槊慷嘁粋€(gè)步驟都會(huì)在一定程度上降低蛋白的產(chǎn)出量。

　　蛋白純化的步驟：

　　1、樣品準(zhǔn)備。在準(zhǔn)備好所有設(shè)備及耗材后，對(duì)目的蛋白進(jìn)行預(yù)處理，去除雜質(zhì)、組織、脂肪等，保證樣品的生物活性;

　　2、準(zhǔn)備好純化柱。將純化柱固定好，并打開封蓋;

　　3、樣品加載。將樣品從純化柱底部接入引流管，并將樣品導(dǎo)入純化柱內(nèi)部;

　　4、洗脫。將純化柱內(nèi)充滿樣品后，對(duì)其進(jìn)行洗脫。比如使用乙醇將雜質(zhì)和緩沖液沖洗掉;

　　6、再生及使用。根據(jù)需要對(duì)純化柱進(jìn)行再生，恢復(fù)其功能，以便于下一次使用;

　　7、收集及檢測(cè)。對(duì)收集所得上清液和洗脫液，并對(duì)所得樣品進(jìn)行檢測(cè)，評(píng)估出目的蛋白純度;

　　當(dāng)然了，如上的重組蛋白蛋白純化方法為一般蛋白純化流程，具體的蛋白純化需要根據(jù)蛋白的性質(zhì)和需求來(lái)進(jìn)行改變，雖然說(shuō)大體過(guò)程相同，但是一些細(xì)節(jié)操作方面有著一定的不同。在實(shí)際操作中，還需要控制好實(shí)驗(yàn)的精確性，這樣才能在更大程度上保證蛋白的完整度和生活活性。武漢普健生物專業(yè)為廣大用戶提供重組蛋白純化操作，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。