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我們?cè)谶M(jìn)行蛋白表達(dá)的時(shí)候常常會(huì)接觸到一個(gè)概念：原核表達(dá)和真核表達(dá)。起初我一直以為原核表達(dá)只是蛋白表達(dá)的一種方式，用來(lái)和真核蛋白表達(dá)進(jìn)行區(qū)分。但是后來(lái)才發(fā)現(xiàn)，這個(gè)表達(dá)的意義不止于此。為了讓大家更加方便地了解相關(guān)信息，普健生物在這里和大家具體聊聊。
什么是有原核蛋白表達(dá)?
所謂的原核蛋白表達(dá)其實(shí)就是通過(guò)基因克隆技術(shù)，將外源目的基因通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體，并通過(guò)表達(dá)菌株，使得其在特定的原核生物中得以表達(dá)的方式。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，就是將目的基因克隆到載體的表達(dá)序列中，而后通過(guò)特定的原核生物表達(dá)出來(lái)的方式(目前最常用的表達(dá)菌株為大腸桿菌，也就是說(shuō)，絕大多數(shù)的目的基因都是在大腸桿菌中表達(dá)出來(lái)的)。
那么，原核蛋白表達(dá)的原理是什么呢?
按照宿主來(lái)分，原核表達(dá)系統(tǒng)常用的有大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)、芽孢桿菌表達(dá)系統(tǒng)、鏈霉菌表達(dá)系統(tǒng)。而大腸桿菌因?yàn)槠溥z傳背景清晰，目的蛋白表達(dá)水平高、培養(yǎng)周期短、抗污染能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，使得其成為原核表達(dá)的首選。
原核蛋白表達(dá)的流程為：原核表達(dá)載體構(gòu)建、轉(zhuǎn)化到高效的表達(dá)宿主中、目的蛋白誘導(dǎo)表達(dá)、細(xì)菌擴(kuò)大培養(yǎng)、制備蛋白提取物、目的蛋白純化。
看這個(gè)過(guò)程，相信大家應(yīng)該都不會(huì)覺(jué)得困難。確實(shí)，首先通過(guò)基因工程技術(shù)，將目的蛋白基因置入到載體基因中，這個(gè)過(guò)程可以說(shuō)非常的重要、而后通過(guò)一定的誘導(dǎo)手段，比如加入IPTG誘導(dǎo)劑，來(lái)誘導(dǎo)目的DNA的表達(dá)。當(dāng)?shù)鞍妆磉_(dá)出來(lái)之后，我們?cè)偻ㄟ^(guò)相應(yīng)的方式，對(duì)所得蛋白進(jìn)行相關(guān)的檢測(cè)，比如考馬斯亮藍(lán)染色或免疫印跡等方法。相關(guān)檢測(cè)確定蛋白合格后，再通過(guò)蛋白純化的手段提純蛋白。
當(dāng)然了，在這個(gè)過(guò)程中涉及到很多細(xì)節(jié)操作方面的問(wèn)題，而且涉及到很多操作方面的小技巧，這些方面都需要引起關(guān)注，可以說(shuō)，這些細(xì)節(jié)方面的問(wèn)題是實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)理想與否的關(guān)鍵因素。普健生物做為一家擁有15年蛋白制備經(jīng)驗(yàn)的企業(yè)，專業(yè)為廣大用戶提供原核蛋白表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢。
