蛋白純化之前常用的一些提取和分離方法簡介

　　蛋白純化之前我們都需要優(yōu)先對(duì)其進(jìn)行提取和分離，這樣能夠極大減少我們純化的過程，而且能讓純化的效果更好。那么，所謂的蛋白提取和分離是具體操作的呢?今天，普健生物就在這里和大家具體降解。

　　對(duì)于固態(tài)樣品材料我們采用先提取后分離的方式，對(duì)于微生物發(fā)酵或動(dòng)植物細(xì)胞培養(yǎng)所得的懸浮液則會(huì)因?yàn)榧?xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的情況而方法不同。

　　細(xì)胞內(nèi)：需要先破碎細(xì)胞，并且在細(xì)胞破碎的過程中加入蛋白抑制酶，以防止細(xì)胞內(nèi)蛋白的降解。同時(shí)盡量保持在低溫情況下操作;

　　細(xì)胞外：因?yàn)榈鞍状嬖谟趹腋∫褐?，我們只需要?duì)其進(jìn)行離心、過濾等過程就能進(jìn)行固液分離，去除其他顆粒物質(zhì);

　　為了保證提取出更多目的蛋白，并減少其活性確實(shí)，我們常常采用各種水溶液來輔助分離，通常在偏離蛋白等電點(diǎn)0.5ph單位以上時(shí)，能更大程度上提升蛋白的溶解度。

　　1、對(duì)于等電點(diǎn)在堿性范圍內(nèi)的蛋白，我們可以考慮加入稀酸;

　　2、對(duì)于等電點(diǎn)在酸性范圍內(nèi)的蛋白，可以用稀酸提取(這樣有助于提升蛋白在提取液中的溶解度);

　　當(dāng)然了，在加入稀酸的過程中，我們也要注意提取液的PH值，一定要保證過期在蛋白穩(wěn)定的范圍內(nèi)。

　　在細(xì)胞破碎后進(jìn)行的蛋白提取，因?yàn)榇蟛糠值哪康牡鞍自趹腋∫褐校瑸榱藴p少損失，我們需要使用到力量的緩沖液。

　　對(duì)于動(dòng)物組織來說，使用的緩沖液為動(dòng)物組織的2-2.5倍;

　　對(duì)于植物細(xì)胞來說，只需要使用少量的緩沖液即可;

　　當(dāng)然了，細(xì)節(jié)方面的操作也很多，而且在通過離心、沉淀等一系列的過程后，蛋白的純度有了一定的提升，但是還是達(dá)不到我們使用的要求。這個(gè)時(shí)候，我們就需要對(duì)蛋白進(jìn)行進(jìn)一步的純化工作，通過一系列的純化手段，才能得到適宜濃度的蛋白產(chǎn)品。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供蛋白純化服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。