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大腸桿菌是最早用來(lái)表達(dá)重組蛋白的第一個(gè)宿主，因?yàn)槠涑杀镜?、效率高、遺傳背景清晰等特點(diǎn)，使得其在實(shí)驗(yàn)室中使用非常的廣泛。但是，對(duì)于很多人來(lái)說(shuō)，想要完美實(shí)現(xiàn)大腸桿菌原核蛋白表達(dá)相對(duì)來(lái)說(shuō)也是非常困難的。有鑒于此，普健生物在這里和大家具體聊聊有關(guān)原核細(xì)胞表達(dá)的常見(jiàn)問(wèn)題。
問(wèn)題一：什么情況下選擇大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)
大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)是最常見(jiàn)的表達(dá)系統(tǒng)之一，優(yōu)點(diǎn)是遺傳背景清晰、成本低、表帶量高等，缺點(diǎn)是容易形成包涵體以及無(wú)法進(jìn)行表達(dá)后修飾。所以，這個(gè)表達(dá)系統(tǒng)更適合用來(lái)進(jìn)行原核表達(dá)不需要后期修飾的蛋白，特別是小分子蛋白;
問(wèn)題二：如何形成二硫鍵
未改造的大腸桿菌形成二硫鍵的能力相對(duì)要差一些，需要有針對(duì)性地對(duì)二硫鍵形成進(jìn)行改造，提升其表達(dá)能力;
問(wèn)題三：大腸桿菌的表達(dá)載體有哪些
用于大腸桿菌表達(dá)的載體較多，常用的有pET系列、pGEX系列、pCold系列等;
問(wèn)題四：如何實(shí)現(xiàn)大腸桿菌的分泌表達(dá)
大腸桿菌擁有一套特殊的分泌機(jī)制，通過(guò)外分泌信號(hào)將蛋白富集到培養(yǎng)基中，但是由于其細(xì)胞壁較厚，使得分泌所得的蛋白量較低;
問(wèn)題五：為什么會(huì)形成包涵體
原核表達(dá)常常會(huì)因?yàn)榈鞍椎腻e(cuò)誤折疊或過(guò)快表達(dá)而形成包涵體，主要原因是因?yàn)椋耗繕?biāo)產(chǎn)物本身性質(zhì)不合、宿主體系不合以及表達(dá)條件不合等原因;
問(wèn)題六：原核表達(dá)如何實(shí)現(xiàn)蛋白純化
原核表達(dá)蛋白純化的方式主要有親和層析、離子交換、凝膠排阻層析等;
問(wèn)題七：去除信號(hào)肽會(huì)不會(huì)影響蛋白表達(dá)
原核表達(dá)真核蛋白時(shí)信號(hào)肽是一定要去除的，這個(gè)方法在大腸桿菌中可行;
問(wèn)題八：如何提升蛋白的可溶性
原核大量表達(dá)時(shí)，很容易形成包涵體，可以通過(guò)選擇促溶標(biāo)簽、篩選合適宿主菌、改變培養(yǎng)誘導(dǎo)條件等方法提升其可溶性;
總的來(lái)說(shuō)，大腸桿菌原核蛋白表達(dá)過(guò)程中需要注意的事項(xiàng)還是比較多的，但是相比其他技術(shù)來(lái)說(shuō)，其技術(shù)條件相對(duì)成熟，操作也更加方便。當(dāng)然了，對(duì)于一些特殊表達(dá)，大腸桿菌可能不合適，這個(gè)時(shí)候就需要挑選一個(gè)更加合適的表達(dá)方法了。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供大腸桿菌原核表達(dá)服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
