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真核蛋白表達相信大家不會覺得陌生，我們前面和大家具體聊過有關(guān)真核表達的幾種方式以及其優(yōu)勢所在：“常見的真核表達系統(tǒng)有哪幾種?它們各自有哪些優(yōu)勢?”。今天普健生物再和大家具體聊聊有關(guān)真核表達的步驟以及在表達過程中導致其表達低下的原因。
真核表達，顧名思義，就是利用真核細胞進行蛋白表達的技術(shù)服務，通常在需要大量高質(zhì)量蛋白的時候會采用這個方式，當然了，藥物開發(fā)以及生物學研究上也常常會使用到。
真核表達服務的具體步驟一般如下：
1、基因克隆。通過基因技術(shù)將目的基因克隆到真核的表達載體當中去;
2、細胞培養(yǎng)。將載體轉(zhuǎn)染到真核細胞中，并通過細胞培養(yǎng)的方式對細胞進行擴增;
3、蛋白表達。通過操作以及環(huán)境搭配等手段滿足蛋白的表達條件，使得目的蛋白得以表達;;
4、蛋白純化。通過相關(guān)技術(shù)對蛋白進行純化(具體純化方法可參考“蛋白純化方法之沉淀法的幾種常用方式介紹”);
當然了，不同的蛋白表達公司因為技術(shù)實力、實驗環(huán)境以及儀器使用等方面的不同，在表達結(jié)果方面會存在很大的不同，甚至會出現(xiàn)表達量低的情況。為什么會會發(fā)生這樣的情況呢?且聽普健生物和您具體分析。
一般來說，導致蛋白表達量低下的原因有很多，主要是如下幾種：
1、轉(zhuǎn)染效率低。在進行細胞轉(zhuǎn)染時，有一定的概率會發(fā)生轉(zhuǎn)染率低的現(xiàn)象(當然了，也只有少數(shù)細胞會出現(xiàn)這個情況)，從而造成蛋白表達量降低;
2、基因轉(zhuǎn)錄水平低。一些基因的表達會受到細胞因子調(diào)節(jié)的原因，造成表達載體轉(zhuǎn)錄水平低而造成蛋白表達低的情況;
3、翻譯后修飾不完整。在進行蛋白修飾的過程中發(fā)生了異常，導致蛋白結(jié)構(gòu)不完整，從而造成表達量低的情況;
4、表達的蛋白不穩(wěn)定。表達后的蛋白在溶液中因為不穩(wěn)定的情況，出現(xiàn)失活的現(xiàn)象;
5、細胞毒素的影響。細胞產(chǎn)生的毒素造成蛋白失活;
6、條件不符合。蛋白表達的環(huán)境達不到要求，造成蛋白表達量低;
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