重組抗體表達(dá)項(xiàng)目案例

　　本案例基于普健自有哺乳表達(dá)系統(tǒng)—高產(chǎn)量pATX系列載體及馴化CHO系列細(xì)胞，通過密碼子優(yōu)化，基因合成方法，合成重鏈和輕鏈的可變區(qū)，再分別通過亞克隆的方式將可變區(qū)構(gòu)建至PATX系列表達(dá)載體，雙質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染XtenCHO細(xì)胞，通過SDS-PAGE驗(yàn)證重組抗體表達(dá)情況，經(jīng)表達(dá)驗(yàn)證后，擴(kuò)大培養(yǎng)收集細(xì)胞上清并通過proteinA親和柱純化獲得重組抗體。

二、實(shí)驗(yàn)方案

　　(1)以客戶提供的重鏈輕鏈序列為模板，通過密碼子優(yōu)化，選擇更適宜XtenCHO細(xì)胞系的基因序列，進(jìn)而確         定表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建方案。

　　(2)采用普健生物自主載體PATX進(jìn)行構(gòu)建，經(jīng)測序驗(yàn)證無誤后，提取無內(nèi)毒素質(zhì)粒。

　　(3)轉(zhuǎn)染前，確定XtenCHO細(xì)胞狀態(tài)，待轉(zhuǎn)染完成，培養(yǎng)數(shù)天后收取上清，通過SDS-PAGE驗(yàn)證重組抗體表         達(dá)情況，最后通過Protein A純化法獲得重組抗體。

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

　　(1)抗體純度鑒定

圖 1. 抗體質(zhì)檢圖. 考馬斯亮藍(lán)染色.

A. 還原PAGE. B. 非還原 PAGE.

　　(2)通過SEC-HPLC進(jìn)一步純化，獲得單一峰的重組抗體，HPLC檢測純度在98%。

　　(3)抗體交付

　　純化抗體產(chǎn)量：5L表達(dá)體系

         注：內(nèi)毒素水平：0.45 EU/ml

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