基于兔免疫抗體庫制備兔單克隆抗體

作為靶向特異性抗體的來源，兔比小鼠具有獨特的優(yōu)勢。它們產(chǎn)生的親和力抗體高于小鼠，并可能針對小鼠免疫原性差或耐受差的抗原或表位引發(fā)強烈的免疫反應。然而，由于小鼠融合伙伴細胞系的廣泛應用，以及成熟的融合和克隆小鼠雜交瘤的工具和方案，目前絕大多數(shù)單克隆抗體來源于小鼠。噬菌體展示技術篩選抗體庫是一種替代雜交瘤技術制備特異性單克隆抗體的方法。利用免疫動物的B細胞構建抗體文庫，通過噬菌體展示技術對抗體文庫進行篩選，可以獲得高親和力的非鼠源單克隆抗體。

基于噬菌體展示技術的兔免疫Fab庫的建立，可以方便地分離兔單克隆抗體。免疫后，從動物脾臟中提取B細胞cDNA，通過PCR擴增抗體可變域庫并組裝成Fab庫。然后將Fab基因克隆到噬菌體載體并轉化到大腸桿菌，完成兔免疫Fab基因文庫的構建。該文庫可針對免疫抗原進行生物篩選，用于快速鑒定高親和力、靶向特異性的兔單克隆抗體。

抗體庫是編碼特性未知抗體的抗體基因的巨大集合（通常大于10¹⁰）。抗體庫是通過噬菌體展示和其他體外選擇技術來發(fā)現(xiàn)抗體的重要來源，其設計是成功發(fā)現(xiàn)抗體的關鍵。抗體庫的類型包括隨機肽庫、免疫庫和天然庫。

隨機肽庫：將化學合成的隨機寡核苷酸序列與噬菌體的表面蛋白基因融合，在噬菌體表面表達出各種氨基酸組合的隨機序列短肽。利用噬菌體展示隨機肽庫可以高通量篩選各種抗原的抗原表位

免疫庫：免疫庫由經(jīng)過免疫(包括疫苗注射、微生物感染、自身免疫疾病、腫瘤等)后的供體B淋巴細胞的抗體基因構建。對于特定免疫抗原的抗體淘選的效率較高，但一般僅適用于一種特異性抗體的選擇，庫容量要求不高，一般10⁶-10⁸的庫容量就可滿足需要

天然庫：采用不經(jīng)免疫的人或動物來源的外周血淋巴細胞、骨髓、脾細胞的B細胞作為材料，進行基因擴增，但親和力通常較低。骨髓內(nèi)和骨髓外所有抗體基因都包含在內(nèi)，所構建的抗體庫適用于所有抗原所對應的抗體的選擇，庫容量要求較高，最小需要達到 10⁹，因為目前估算的自然界的抗原種類在這個數(shù)量級上

普健生物構建了千億級別、高親和力全人源重組天然抗體文庫，經(jīng)過驗證，任意靶點從文庫中直接篩選，一般可以獲得十幾個到上百個高親和力的克隆，其親和力、特異性都達到行業(yè)領先水平。

優(yōu)勢：
1.序列正確性高，現(xiàn)階段庫容已達近千億級別（10¹¹pfu)。
2.兩步法建庫，先連入輕鏈再連入重鏈，將來自全世界不同地區(qū)人種來源的輕鏈和重鏈隨機組合，保證了庫的高質(zhì)量和多樣性。
3.分為κ和λ兩種輕鏈亞型的單鏈抗體庫，與大多數(shù)商業(yè)化混合庫不同，即可用于篩選κ型抗體，也可用于篩選λ型的高親和力抗體。
4.帶有His標簽，可直接用phagemid表達抗體，His標簽純化


 

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