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雜交瘤細(xì)胞測(cè)序的步驟及其優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用

發(fā)表時(shí)間:2023-10-26 訪問(wèn)次數(shù):1536

  在雜交瘤細(xì)胞制備的過(guò)程中,雖然篩選出來(lái)的雜交瘤細(xì)胞能夠通過(guò)冷凍保存,但是依然存在細(xì)胞失活的風(fēng)險(xiǎn)。所以,為了克服雜交瘤細(xì)胞保存的問(wèn)題,我們常常會(huì)選擇對(duì)雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行測(cè)序,能夠快速且準(zhǔn)確地進(jìn)行后期的抗體制備。今天,普健生物和大家具體聊聊有關(guān)雜交瘤細(xì)胞測(cè)序的具體步驟和應(yīng)用。

  雜交瘤細(xì)胞測(cè)序的具體步驟:

  1、雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)。先取出雜交瘤細(xì)胞進(jìn)行復(fù)蘇,然后在37度的環(huán)境下培養(yǎng)10天,至細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛時(shí)再收集細(xì)胞;

  2、mRNA提取。裂解細(xì)胞后加入氯仿,離心15分鐘后提取上清液。取上清液并加入異丙醇離心10分鐘,取沉淀洗凈,晾干后加入適量DEPC溶解;

  3、轉(zhuǎn)率cDNA。選擇合適的反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增,合成cDNA第一條鏈,而后根據(jù)已知的cDNA合成第二條鏈;

  4、獲得可變區(qū)基因。對(duì)cDNA進(jìn)行擴(kuò)增,獲得輕鏈/重鏈可變區(qū)基因;

  5、抗體測(cè)序。對(duì)基因進(jìn)行陽(yáng)性克隆并測(cè)序;

  6、分析測(cè)序結(jié)果。通過(guò)生物信息學(xué)分析,得到抗體序列;

  雜交瘤細(xì)胞測(cè)序的優(yōu)勢(shì):

  雜交瘤測(cè)序可以更為準(zhǔn)確地進(jìn)行質(zhì)譜分析,能夠提供更加準(zhǔn)確且可靠的結(jié)果;

  雜交瘤細(xì)胞測(cè)序的應(yīng)用:

  1、用于進(jìn)行相關(guān)基因測(cè)序的專(zhuān)利性保護(hù);

  2、用于保存測(cè)序信息,防止雜交瘤細(xì)胞丟失單抗信息;

  3、用于表達(dá)純度更高的重組單克隆抗體;

  4、縮短雜交瘤細(xì)胞克隆的耗時(shí)過(guò)程,加速單克隆抗體生產(chǎn);

  5、提升單抗親和力;

  6、構(gòu)建嵌合抗體以及抗體人源化;

  雜交瘤抗體測(cè)序能夠帶來(lái)的好處是毋庸置疑的,不僅能夠有效降低抗體制備的批次性差異問(wèn)題,更是能夠在極大程度上提升抗體的親和力。當(dāng)然了,測(cè)序的過(guò)程相對(duì)來(lái)說(shuō)要復(fù)雜一些,需要一定的技術(shù)支持。普健生物專(zhuān)業(yè)為廣大用戶(hù)提供雜交瘤抗體測(cè)序服務(wù),如果您有相關(guān)需求,歡迎來(lái)電咨詢(xún)。