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抗體測(cè)序，其實(shí)就是對(duì)抗體蛋白進(jìn)行從頭到尾的一次序列測(cè)試工作，它廣泛應(yīng)用于基因組序列、外顯子序列、DNA甲基化序列以及RNA轉(zhuǎn)錄組序列。在我們進(jìn)行單克隆抗體生產(chǎn)的時(shí)候，就常常會(huì)使用抗體測(cè)序技術(shù)，可以說，雜交瘤技術(shù)是目前抗體測(cè)序技術(shù)會(huì)用最廣泛且最成熟的一個(gè)平臺(tái)。
什么是抗體測(cè)序技術(shù)?
其實(shí)抗體測(cè)序技術(shù)的原理和我們上面說的一樣，就是通過對(duì)抗體蛋白進(jìn)行從頭到尾的測(cè)序。通過多酶解技術(shù)，通過高分辨率質(zhì)譜和獨(dú)特的數(shù)據(jù)分析的方式來進(jìn)行相關(guān)序列的檢測(cè)。其原理為通過測(cè)量串聯(lián)質(zhì)譜中兩個(gè)片段離子之間的質(zhì)量差來確定蛋白氨基酸殘基的質(zhì)量，然后沿著蛋白的主鏈來確定每個(gè)氨基酸，最終得到氨基酸的完整序列的方式。
抗體測(cè)序的主要流程是什么?
1、全序列覆蓋
在通過如上方法進(jìn)行抗體測(cè)序的時(shí)候，需要確保每個(gè)點(diǎn)位的氨基酸有超過10中不同的肽段支持，在對(duì)氨基酸進(jìn)行質(zhì)量控制，確保每個(gè)質(zhì)譜里都有強(qiáng)離子片段峰證據(jù)。這樣，才能保證其全序列覆蓋;
2、抗體質(zhì)量核對(duì)
對(duì)輕重鏈進(jìn)行質(zhì)量測(cè)定，確保其在范圍內(nèi)，以確保組裝的抗體序列;
3、亮氨酸和異亮氨基酸確定
亮氨酸和異亮氨酸的殘基通常是無法區(qū)分的，但是卻又容易造成其親和力出現(xiàn)偏差的情況。所以，我們?cè)谶M(jìn)行相關(guān)測(cè)試的時(shí)候，可以使用一種集成的策略，通過同源性數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的方式，明確區(qū)分亮氨酸和異亮氨酸;
其實(shí)抗體測(cè)序的原理并不復(fù)雜，但是，很多用戶在自行進(jìn)行相關(guān)測(cè)序的時(shí)候，往往會(huì)出現(xiàn)這樣或那樣的問題，最終造成結(jié)果偏差的情況。總的來說，主要是一些細(xì)節(jié)方面的問題，只要將這些方面的做好，測(cè)序則完全不是問題。普健生物專業(yè)為廣大用戶提供抗體制備、蛋白表達(dá)以及抗體測(cè)序服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來電咨詢。
