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一、概述
兔單抗與傳統(tǒng)的雜交瘤鼠單抗相比具有更好的抗原識別功能。由于兔骨髓瘤細(xì)胞株受專利保護(hù)，無法利用雜交瘤技術(shù)開發(fā)兔單抗，普健生物建立了噬菌體展示抗體文庫技術(shù)平臺以及新型的Xten™ Mab Single B兔單克隆抗體開發(fā)技術(shù)平臺。
單個(gè)B細(xì)胞抗體制備技術(shù)是近年來新發(fā)展的一類快速制備單克隆抗體的技術(shù)，是根據(jù)每一個(gè)B細(xì)胞只含有一個(gè)功能性重鏈可變區(qū)DNA序列和一個(gè)輕鏈可變區(qū)DNA序列，以及每一個(gè)B細(xì)胞只產(chǎn)生一種特異性抗體的特性，從免疫動(dòng)物脾組織或外周血中分離抗原特異性B細(xì)胞，通過單細(xì)胞PCR技術(shù)從分泌抗體的單個(gè)B細(xì)胞中擴(kuò)增IgG重鏈和輕鏈可變區(qū)基因，然后在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)并獲得具有生物活性的單克隆抗體。
圖1. XtenTM Mab 兔單克隆抗體開發(fā)流程
二、服務(wù)內(nèi)容
| 服務(wù)項(xiàng)目 | 客戶提供 | 服務(wù)內(nèi)容 | 服務(wù)周期 | 交付內(nèi)容 |
| XtenTM Mab 兔單克隆抗體開發(fā) | 抗原序列 |
抗原制備 動(dòng)物免疫 脾細(xì)胞分離及陽性B細(xì)胞篩選 陽性克隆抗體可變區(qū)擴(kuò)增及測序分析 重組抗體表達(dá)及純化 |
12周 |
100µg/株單抗 pUC質(zhì)粒 3株最優(yōu)的抗體序列 技術(shù)服務(wù)報(bào)告 |
案例展示：
利用兔單B 抗體技術(shù)開發(fā)Anti-human CD86 兔單抗。選取血清效價(jià)大于128K 的兔子，分離PBMC細(xì)胞進(jìn)行流式分選， 獲得human CD86抗原特異性B細(xì)胞鋪板。
圖1 兔單B 細(xì)胞流式分選結(jié)果
使用普健生物XtenCHO高密度瞬轉(zhuǎn)表達(dá)系統(tǒng)，體外重組表達(dá)部分陽性克隆抗體，純化后進(jìn)行功能驗(yàn)證。
圖2 兔單抗重組表達(dá)分析
純化后的抗體進(jìn)行IF及內(nèi)源WB 驗(yàn)證。IF結(jié)果顯示抗體靈敏度高，抗原定位正確;內(nèi)源WB 結(jié)果顯示，主帶明顯，無非特異性結(jié)合條帶。
圖3 Anti-human CD86 兔單抗IF 檢測結(jié)果
RAJI細(xì)胞，一抗1:50，二抗1:50， 曝光時(shí)間30ms
圖4 Anti-human CD86 兔單抗內(nèi)源WB分析
Lane 1: Daudi cell lysate ;Lane2: Raji cell lysate.
