在納米抗體制備過程中,羊駝免疫可以說是制備的起點,只有這個過程進行得順利,后續(xù)的實驗才能夠得以進行。那么,羊駝免疫的具體過程您知道嗎?今天,普健生物就在這里和大家一一介紹。
1、抗原準備。一般來說,一只羊駝可以同時免疫1-3個抗原,劑量保持在1-2mg之間,在免疫前,我們需要將抗原與佐劑以1:1的比例進行混合,并在4度環(huán)境下保持一段時間;
2、免疫羊駝。記錄羊駝耳號,而后從羊駝頸部靜脈2點注射,每點注射0.4mL混合液。觀察半小時后,如果羊駝狀態(tài)良好,則每2周再免疫一次;
3、采血。4次免疫后,每隔5-7天采血一次,每次50mL;
4、血清分離。每次采血都從其中抽取5mL血液進行預冷,而后在25度環(huán)境下進行離心,30分鐘后去其上層血清用于抗體效果評價;
5、淋巴細胞提取。在離心管中加入分離液,然后以1:1的比例加入血液(注:注入血液時要緩慢注入,防止血液與分離液混合),之后離心30分鐘,而后將上層血清保存到新的離心管中,-80度保存。取出其中棉狀免疫細胞至新的理線管中,加入PBS緩沖液,25度下離心20分鐘,去除上清液,根據(jù)細胞數(shù)目溶解分離出淋巴細胞溶液,-80度保存;
關于免疫中需要注意的一些事項:
1、羊駝和抗原的選擇直接關系到實驗的成敗,所以,我們盡量要選擇健康強壯狀態(tài)良好的羊駝,并選擇合適純度的免疫抗原;
2、淋巴液需要及時分離提取,這樣才能在更大程度上防止溶血情況的出現(xiàn);
3、免疫周期也可能會影響到免疫效果,一般1-2周間隔免疫最好;
總的來說,羊駝免疫過程中需要注意到的事項很多,但是如果我們按照實驗規(guī)范嚴格操作的話,就能有效提升實驗的成功率。對于大部分的客戶來說,自己免疫的成功率和成本投入量是非常高的,這個時候我們就可以考慮直接購買納米抗體的方式,所得的納米抗體無論是質量上還是純度上都能夠達到實驗要求。更多納米抗體制備知識,盡在普健生物。