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前面我們和大家具體介紹過(guò)“抗體人源化的分類(lèi)”，今天，我們?cè)谶@里具體再和大家聊聊有關(guān)抗體人源化中的一些介紹過(guò)程。
抗體人源化作為解決鼠源抗體免疫原性的方式，其制作過(guò)程雖然說(shuō)各有不同，但是，整體的過(guò)程也是大致相同的，但是，很多人在實(shí)驗(yàn)的過(guò)程中，常常會(huì)碰到一些問(wèn)題，出現(xiàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果偏差的現(xiàn)象。其實(shí)這個(gè)問(wèn)題非常的常見(jiàn)，主要還是因?yàn)槲覀儧](méi)有嚴(yán)格地按照順序來(lái)進(jìn)行。下面，普健生物就和大家具體聊聊有關(guān)抗體人源化的實(shí)驗(yàn)步驟。
1、抗體可變區(qū)/抗體全長(zhǎng)測(cè)序
通過(guò)對(duì)鼠源單克隆抗體細(xì)胞系進(jìn)行可變區(qū)/抗體全長(zhǎng)基因序列測(cè)序。
2、嵌合抗體表達(dá)及抗原抗體結(jié)合分析
在過(guò)程1的基礎(chǔ)上，結(jié)合可變區(qū)的序列和人源恒定區(qū)進(jìn)行嵌合抗體序列的設(shè)計(jì)，然后再通過(guò)哺乳系統(tǒng)來(lái)進(jìn)行嵌合抗體的表達(dá);通過(guò)對(duì)嵌合抗體的抗原抗體進(jìn)行分析，同時(shí)提供樣本進(jìn)行親和力檢測(cè)。
3、人源化抗體設(shè)計(jì)
通過(guò)CDR移植、回復(fù)突變、生物信息學(xué)分析等方法對(duì)抗體的VH和VL區(qū)域進(jìn)行人源化設(shè)計(jì)。
4、人源化抗體表達(dá)
密碼子優(yōu)化，基因合成，亞克隆，轉(zhuǎn)染，抗體表達(dá)及純化，8-10周。
5、人源化抗體性質(zhì)檢測(cè)
結(jié)合力檢測(cè)：ELISA/FACS測(cè)定EC50值，或Biacore/Octet測(cè)定Kd值;人源化抗體體外生物活性分析并與嵌合抗體進(jìn)行比較;人源化抗體與同源性物種的交叉反應(yīng)性分析;人源化抗體生物物理特性分析：SEC-HPLC分析，DS-PAGE分析，DSC分析。
對(duì)于抗體人源化來(lái)說(shuō)，人源化替換點(diǎn)可以說(shuō)直接影響到CDR區(qū)構(gòu)象的關(guān)鍵，所以，需要引起高度的重視。否則，極有可能體驗(yàn)“一失足成千古恨”的感覺(jué)。普健生物為廣大用戶(hù)提供專(zhuān)業(yè)的抗體人源化服務(wù)，如果您有相關(guān)需求，歡迎來(lái)電咨詢(xún)。
